téhnologi péptida FRET

Transfer énergi résonansi fluoresensi (FRET)

Transper énergi résonansi fluoresensi (FRET) nyaéta prosés mindahkeun énergi non-radiatif dimana énérgi kaayaan gumbira donor ditransferkeun ka kaayaan bungah akséptor ngaliwatan interaksi pasangan listrik antarmolekul.Prosés ieu teu ngalibetkeun foton sahingga non-radiatif.Assay ieu gaduh kaunggulan janten gancang, sénsitip sareng sederhana.

Pewarna anu dianggo dina uji FRET tiasa sami.Tapi dina kalolobaan aplikasi, dyes béda sabenerna dipaké.Singketna, mindahkeun énergi résonansi luminous nyaéta mindahkeun sapasang dipol tina donor (pewarna 1) ka akseptor (pewarna 2) nalika gugus donor bungah.Sacara umum, spéktrum émisi grup fluorophore Donor tumpang tindih jeung spéktrum serapan grup Acceptor."Nalika jarak antara dua fluorophores luyu (10 - 100 A), mindahkeun énergi fluorophore ti donor ka akséptor bisa dititénan."Métode mindahkeun énergi gumantung kana struktur kimia reséptor:

1. Ieu dirobah jadi Geter molekular, nyaeta, cahaya luminous mindahkeun énergi disappears.(Reséptor nyaéta pemadam cahaya)

2. Émisi leuwih sengit ti reséptor sorangan, hasilna redshift dina spéktrum fluoresensi sékundér.(Reséptor mangrupakeun emitter luminous).

Grup donor (EDANS) jeung gén akséptor (DABCYL) anu seragam numbu ka substrat alam protease HIV, sarta lamun substrat teu dipegatkeun sambungan, DABCYL bisa quenle EDANS lajeng jadi undetectable mun fluorine.Kana HIV-1 protease disconnection, EDANS geus euweuh quenched ku DABCYL, sarta EDANS luciferases salajengna bisa dideteksi.Kasadiaan sambetan protease tiasa dipantau ku parobahan dina inténsitas fluoresensi EDANS.

Péptida FRET mangrupikeun alat anu cocog pikeun diajar nonspésifik peptidase.Kusabab prosés réaksina tiasa terus-terusan diawaskeun, éta nyayogikeun metode anu gampang pikeun ngadeteksi kagiatan énzim.Kilap anu dihasilkeun saatos hidrolisis beungkeut péptida ku donor/acceptor nyadiakeun ukuran aktivitas énzim dina konsentrasi nanomolar.Nalika péptida FRET gembleng, éta nembongkeun leungit ngadadak flash internal, tapi lamun sagala beungkeut péptida sabalikna donor / akséptor megatkeun, éta ngaleupaskeun flash, nu bisa dideteksi terus-terusan sarta aktivitas énzim lajeng bisa diitung.